RNA提取，对于整个分子生物学实验来说，算是比较有难度的操作了，提取出RNA如何判断质量的好坏呢？那当然通过电泳图了。本次小编将讲述电泳图上的秘密，帮助您更好的来提取RNA，提高成功概率。

1. RNA条带不亮或缺失

（1）上样量不足。

（2）染色剂不足或染色剂分布不均匀。

（3）RNA跑出凝胶。电泳至溴酚蓝至凝胶的2/3即可停止电泳。另外电泳槽应水平放置，缓冲液要浸过凝胶，

（4）RNA在凝胶中发生扩散。避免长时间的电泳，否则小片段容易扩散。

（5）RNA降解。最大限度减少在紫外线下暴露的时间，使用新鲜的电泳缓冲液，新制的凝胶，电泳槽及制胶的模具梳子等用双氧水浸泡，高电压短时间电泳（20min）。也可能使用的组织材料不够新鲜（冷冻的材料必须在化冻之前将其磨碎）。

2. RNA条带弥散

（1）RNA被核酸酶降解。要用新的缓冲液，制胶用的模具要清洁，枪头要灭菌。

（2）电泳条件不适合。避免长时间电泳，缓冲液要浸过凝胶，电压要合适，不能过低。电压过高，造成电流过大，也容易引起此现象的发生。一般5—8V/cm.（聚丙烯酰胺电泳多采用8V/cm）所以计算采用电压时应先测量电泳槽两电极之间的距离。为了增加条带的清晰度，电泳开始的几分钟建议使用低电压。

（3）上样量过大。根据沉淀量的多少确定点样的量，一般1—3ul。

（4）胶孔不规则。插梳子时应垂直插入，凝固后拔出梳子。

3. 背景很高

（1）核酸染剂加入的量过多。应按说明书添加。

4. 点样孔发亮

（1）上样量过大。

（2）胶孔未凝固好，使样品无法往前移动。

（3）RNA样品中含有污染物，如残留的蛋白质容易引起此现象。可能trizol量太少，应加大trizol用量。另外若残留DNA也应考虑加大trizol用量。

5. 出现多条带

（1）RNA降解。提取过程中出现降解或电泳过程中出现降解（可能性较小）。

（2）上样量过大。RNA由多种类型组成，若上样量过大则会导致各种类型的RNA（tRNA，mRNA等）均会出现条带。

提取常见问题

1.研磨必须要充分，样品用量要严格。

2.处理的枪头离心管要量少多份，无RNAase的DEPC水也要量少多份，以备分装RNA和调浓度使用。

3.电泳时间10-20min，不宜过长，电压可为120-130V。

4.点样用的10ul枪头也要提前处理。

5.枪头离心管90℃烘干5——6h。

6.电泳时，可以点样Marker作阳性对照。

7.从-70℃冰箱中取出材料要在解冻之前迅速研磨。

8.提出的RNA可在70%酒精-70℃保存一年。

9.所有的东西必须有多余，防止出现用品的损失。

10.试剂瓶可以连续使用。

更多实验咨询关注

欢迎关注